Культивирование микробов в лабораторных условиях

Тема № 2. Физиология микроорганизмов

ЗАНЯТИЕ № 3

ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. ПИТАНИЕ БАКТЕРИЙ. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБОВ И ИХ ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Цель занятий: изучить культуральные и биохимические свойства бактерий; основные биологические свойства аэробов, методы выявления чистых культур аэробов с целью их идентификации.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

  1. Особенности метаболизма бактерий.
  2. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
  3. Питание бактерий.
  4. Основные принципы культивирования.
  5. Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по ферментативной активности.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

об алгоритмах и правилах их использования для идентификации микроорганизмов

Работа № 1. Методы выделения и идентификации аэробных бактерий

Цель: изучить основные методы выделения и идентификации аэробов (см. теоретическую справку)

I

II

III

А) *

IV

III

Культивирование микробов в лабораторных условиях

Ж)

Г)
Б)

)

Е)

В) Д)

Реакция агглютинации

I. Сбор исследуемого материала

II. Посев исследуемых микроорганизмов на простые, ДДС и элективные питательные

среды с целью получения изолированных колоний

III. Накопление чистой культуры на скошенной питательной среде

IV. Идентификация выделенной чистой культуры

А) изучение морфологических и тинкториальных свойств

Б) изучение культуральных свойств

В) изучение антигенной структуры возбудителя с помощью постановки реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными сыворотками

Г) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на среды Гисса

Д) определение чувствительности микробов к антибиотикам, с помощью метода бумажных дисков

Е) проба с бактериофагами (реакция фаголизабельности)

Ж) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания

* проведение внутривидовой идентификации для выявления источников инфекции (фаготипирование)

Работа № 2. Питательные среды

Цель: создать представление о питательных средах; классифицировать предложенные питательные среды; результаты оформить в виде таблицы (см. теоретическую справку)

среда происхождение консистенция назначение
естест-венное искусст-венное жидкая полужидкая плотная общего ДДС элективные
Мясопептон ный агар (МПА)
Мясопептон ный бульон (МПБ)
Среда Эндо
Кровяной агар
Пептонная вода
Среды Гисса
Среда 199
Свернутая сыворотка
Желточно- солевой агар (ЖСА)

Вывод:

Работа № 3. Характер роста бактерий на плотных питательных средах

(культуральные свойства)

Цель: изучить характер роста бактерий на основных и дифференциально-диагностических питательных средах; изучить культуральные свойства микроорганизмов на плотных средах.

Критерии Описание Колонии
1) Форма
2) Размер
3) Характер края
4) Пигмент (цвет)
5) Поверхность
6) Прозрачность
7) Структура
8) Консистенция (вязкость)

Вывод:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 4. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Цель:изучить характер роста бактерий на жидких питательных средах; изучить особенности роста микроорганизмов

Характер роста: 1) диффузный; 2) придонный; 3) поверхностный.

Опыт №1 Опыт №2 Опыт №3

МПБ МПБ 1% пептонная вода

(кишечная палочка) (возбудитель сибирской язвы) (возбудитель холеры)

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 5. Биохимическая активность аэробов (дифференциально-диагностические признаки)

Цель:изучить ферментативную активность микроорганизмов (см. теоретическую справку)

А) Сахаролитическая и протеолитическая активность

Вид м/о Сахаролитическая активность Протеолитическая активность
лактоза глюкоза мальтоза маннит сахароза индол Н2S

Вывод:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Б) Каталазная активность аэробов

Цель:изучить каталазную активность микроорганизмов; определить тип дыхания исследуемой культуры (см. теоретическую справку)

Результат:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Работа № 1

Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий

Чистую культуру бактерий получают для проведения дифференциально-диагностических исследований — идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизмов.

Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами и нативных препаратов.

Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по характеру роста на питательной среде.

При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии и питательную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый пигмент -Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент — Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка).

Работа № 2

Питание микробов

Органов питания нет. Питательные вещества поступают через всю поверхность клетки. Для питания нужны: кислород, азот, углерод, водород. Кислород и водород микробы берут из воздуха и воды. По источникам азота и углерода микробы делятся на:

— аутотрофы,

— гетеротрофы.

Аутотрофы – (литотрофы) – “auto” — своя, сам, “trophika”– питание (“самопитающиеся”). Это микробы, которые усваивают азот и углерод из воздуха или неорганических веществ. Они имеют много ферментов, поэтому способны сами синтезировать органические вещества из неорганических, для этого они используют солнечную энергию — фотосинтетики и химические вещества – хемосинтетики. Это сапрофитные микроорганизмы.

Гетеротрофы – “getero” – другой, “trophika”– питание. Это микробы, которые азот и углерод берут из органических веществ. Они делятся на 2 группы:

– используют органические соединения мертвого субстрата (сапрофиты);

– используют органические соединения организма-хозяина (паразиты).

Культивирование микробов в лабораторных условиях

Для культивирования бактерий применяют питательные среды. Они могут быть естественными (молоко, морковь, картофель), искусственными (готовят специально). Питательные среды могут быть жидкие и плотные. В зависимости от свойств микробов используют разные среды. Их делят на 4 группы:

1) простые (универсальные) — на них растут только нетребовательные микробы (стафилококки, кишечная палочка). Это МПА И МПБ — мясопептонный агар и бульон.

2) сложные (специальные) — на них растут требовательные микробы (стрептококки, пневмококки). Они готовятся из простых сред путем их обогащения:

— сахарный агар,

— кровяной агар

3) элективные (избирательные) — на них растет только один вид микробов, а другие – нет. Например: 1%щелочная пептонная вода — для холерного вибриона, сахарный агар — для стрептококка, сывороточный агар — для дифтерийной палочки и т.д.

4) дифференциально-диагностические — для отличия одного вида от другого по ферментативной активности (среда Эндо, Гисса).

Культивирование микроорганизмов


Похожие статьи.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями: