Титр Coli-количество воды, выраженное в мл. в котором обнаружена 1 бактерия Coli. Титр Coli — показатель фекального загрязнения воды. Для водопроводной воды он не менее 300, для воды таких городов как Москва — не менее 500 , для воды родников грунтовых вод Титр Coliне менее 100, а для чистых открытых водоемов не менее 100. Определение Титр Coliудобно проводить методом мембранных ультрафильтров, этот метод дает возможность получить результат через 48 часов после высева воды, экономя среды. Метод учета бактерий — Coli на мембранных ультрафильтрах разработан Барсовым на Рублевской водопроводной станции.
Мембранные ультрафильтры представляют собой нитроцеллюлозные пленки. Фильтры выпускают 5 номеров. Каждый номер имеет определенный диаметр пор.
Характеристика мембранных ультрафильтров
| № фильтра | Средняя скорость фильтрования 500 мл. воды | Средний d пор в мк. |
| 9,0 | 0,35 | |
| 4,5 | 0,50 | |
| 2,5 | 0,70 | |
| 1,2 | 0,90 | |
| 0,5 | 1,20 |
Все 5 номеров ультрафильтров задерживают содержащихся в воде бактерий. Для санитарного анализа воды наиболее пригодны фильтры № 3. При наличии в воде большого количества взвешенных частиц, воду пропускают через предварительный мембранный фильтр с диаметром пор 5 мк.
Подготовка мембранных фильтров к анализу
Мембранные фильтры проверяют на наличие дефектов и опускают в стакан с дистилированной водой, нагревают до температуры 50-60° С, промывают несколько раз для удаления растворителей и татем кипятят в свежей порции дистиллированной воды (20-30 мин. для стерилизации). Кипячение должно быть стойким, спокойным, иначе фильтры скручиваются и становятся непригодными к работе.
Для фильтрации применяют фильтр Зейтца. Рабочую часть фильтра стерилизуют кипячением. При фильтрации на стерильную сетку аппарата Зейтца накладывают кусочек фильтровальной бумаги, смоченной стерильной водой, а затем стерильный мембранный ультрафильтр. При анализе водопроводной воды через фильтр пропускают не менее 300-500 мл. воды При анализе сильно загрязненной воды из естественных водоемов пробу следует развести стерильной водой с таким расчетом, чтобы на фильтре вырастало не более 50 колоний бактерий Coli. По окончании фильтрации профламбированным пинцетом фильтр помещают в чашку Петри на застывшую среду Эндо так, чтобы между фильтром и поверхностью среды не осталось пузырьков воздуха. Чашки с посевами помещают в термостат на 18-24 часа при температуре 370 С. При определении бактерии Coli в воде из колодцев и открытых источников сапрфиты могут подавлять рост этой бактерии, поэтому рекомендуется проращивать фильтры при температуре 41-430 С. После термостaтирования на фильтрах появляются розово-красные колонии, рекомендуется учитывать: ярко-красные колонии с металлическим блеском Bakt. Coil, блестящие розовые Coli aerogenes, бесцветные с розовым или красным центром Coli citrovorum и прозрачные бесцветные колонии Pamcoli . Характерные для бактерии Coli колонии подсчитывают, пользуясь лупой, готовят из них мазки и окрашивают по Грамму. Отсутствие в мазках бесспоровых грамотрицательных палочек дает основание для отрицательного заключения. При наличии их, оставшуюся часть колоний пересевают на среды Гисса с глюкозой, мальтозой и маннитом. Выращивают 18-24 часа при температуре 420С. Если бактерии разлагают эти углеводы с образованием кислоты (это определяют по изменению окраски среды) и газов, то присутствие бактерии Coli в пробе считается доказанным. Чтобы определить титр Coli, нужно разделить объем профильтрованной воды в мл. на число колоний, характерных для бактерии Coli, выросших на фильтре. По тиру Coli легко рассчитать индекс (количество бактерий в 1 л. воды).
Подсчет количества микроорганизмов в водопроводной воде.
После термостатирования чашки Петри с посевами воды, ее просматривают, считают все выросшие колонии на приборе для подсчета колоний. Можно поступить и так: донышко чашки Петри по стеклу делят на секторы, их количество произвольно зависит от числа колоний в чашке — чем больше колоний, тем больше наносят секторов. Далее последовательно просчитывают все колонии в каждом секторе. Сумма их всех и дает микробное число воды. Одну из наиболее характерных колоний описывают по культуральным и физиологическим признакам, берут из нее мазок, красят но Грамму, микроскопируют и зарисовывают. Описывают морфологические признаки бактерий.
По совокупности признаков определяют хотя бы порядок, к которому принадлежит исследуемая бактерия.
