Цель:ознакомиться с техникой посева на жидкие и плотные питательные среды и указать значение метода(см. теоретическую справку)
| название | рисунок | значение |
| 1) Седиментация по Коху |  | |
| 2) Посев по Дригальскому |  | |
| 3) Посев по Шукевичу |  | |
| 4) Метод укола |  | |
| 5) Посев на скошенный агар |  |
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа№6 Биохимическая активность аэробов (дифференциально-диагностические признаки)
Цель:изучить ферментативную активность микроорганизмов (см. теоретическую справку)
| вид м/о | сахаролитическая | протеолитическая | |||||
| лактоза | глюкоза | мальтоза | маннит | сахароза | индол | Н2S | |
 |  |  |  | |  |  |
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) Каталазная активность аэробов
Цель:изучить каталазную активность микроорганизмов; определить тип дыхания исследуемой культуры (см. теоретическую справку)
 |
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Теоретическая справка
Работа №1
Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий
Чистую культуру бактерий получают для проведения дифференциально-диагностических исследований — идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизмов.
Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами и нативных препаратов.
Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по характеру роста на питательной среде.
При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии и питательную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый пигмент -Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент — Pseudomas aeruginosa (синегнойная палочка).
Работа №2
Питательные среды (состав некоторых питательных сред)
Кровяной агар (для выявления микроорганизмов, вызывающих гемолиз). К расплавленному и охлажденному до 45 °С МПА (2% агара) стерильно добавляют 5-10% дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана.
Пептонная вода. Основной раствор пептона: пептона — 100 г, хлорида натрия -50 г, нитрата калия — 1 г, карбоната натрия — 25 г, воды дистиллированной — 1 л; рН 9,0. Стерилизуют при 120°С 20 мин. Для получения пептонной воды основной раствор разводят водой в 10 раз, доводят рН до 8,8 -8,9, стерилизуют. Используют для культивирования холерных вибрионов.
Свернутая сыворотка. Кровь берут от крупных животных. В продаже имеется стерильная нормальная сыворотка крови животных для бактериологических питательных сред, расфасованная по 250 мл. Можно пользоваться человеческой сывороткой (отходами производства гамма-глобулина), остатками крови при постановке реакции Вассермана и других серологических реакций.
Среды Гисса с углеводами. Пептон — 10 г, хлорид натрия — 5 г, углевод — 10 г, реактив Андреде — 10 мл, вода дистиллированная до 1000 мл, рН после стерилизации 7,2-7,4. Дифференциально-диагностическая среда, на которой выявляют разложение углеводов микроорганизмами.
Мясопептонный агар (МПА). К готовому МПБ добавляют 2% агар и оставляют для набухания 30 мин. Кипятят до полного растворения агара. Стерилизуют 30 мин при 120°С. Применяют для выращивания большинства сапрофитных бактерий.
Среда 199. Синтетическая среда, содержащая аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли. Для выращивания клеток (как ростовую) среду используют с добавлением 5-10% коровьей или лошадиной сыворотки. Трипсин используется при получении культуры клеток для дезагрегации тканей, т.е. для разобщения клеток.
Среда Эндо (готовят непосредственно перед употреблением). К 100 мл МПА (рН 7,6) при температуре 70 °С стерильно добавляют 5 мл 20% раствора лактозы и смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина с 1,25 мл свежеприготовленного
раствора сульфата натрия. Дифференциально-диагностическая среда для культивирования бактерий кишечной группы.
Среда Плоскирева (бактоагар Ж) выпускается в сухом виде и содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Эта среда является не только дифференгщально-диагностической, но и селективной, так как подавляет рост микроорганизмов (кишечная палочка и др.) и способствует лучшему росту некоторых патогенных бактерий (юзбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерии). Лактозоотрицательные образуют на этой среде бесцветные колонии, лактозоположительные — красные.
Среда Левенштейна-Йенсена. Для приготовления этой среды в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина, растворяют: аспарагина 3,6 г, фосфата калия однозамещенного 2,4 г, сульфата магния 0,24 г, цитрата магния 0,6 г, картофельной муки 5 г, малахитового зеленого 0,4 г. Полученную смесь стерилизуют 15 мин при 120 °С. Приготовляют 1000 мл однородной суспензии из свежих яиц. Добавляют стерильно в яичную взвесь основной солевой раствор, подогретый до 45-60°С, тщательно перемешивают, избегая появления пузырьков воздуха, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки и оставляют для свертывания в наклонном положении при 85°С 45 мин.
Желточно — солевой агар (ЖСА) содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков, что обеспечивает элективность среды. Среда позволяет дифференцировать стафилококки, продуцирующие лецитиназу, от стафилококков, не выделяющих данный фермент, по образованию зон помутнения с перламутровым оттенком вокруг колоний лецитиназоположительных видов. Готовят среду из питательного солевого агара. В расплавленный и остуженный до 45 0С агар добавляется куриный желток.
Питание микробов
Органов питания нет. Питательные вещества поступают через всю поверхность клетки. Для питания нужны: кислород, азот, углерод, водород. Кислород и водород микробы берут из воздуха и воды. По источникам азота и углерода микробы делятся на
-аутотрофы,
-гетеротрофы.
Аутотрофы – (литотрофы) – “auto” — своя, сам, “trophika”– питание (“самопитающиеся”). Это микробы, которые усваивают азот и углерод из воздуха или неорганических веществ. Они имеют много ферментов, поэтому способны сами синтезировать органические вещества из неорганических, для этого они используют энергию солнечную — фотосинтетики и химические вещества – хемосинтетики. Это сапрофитные микроорганизмы.
Гетеротрофы – “getero” – другой, “trophika”– питание. Это микробы, которые азот и углерод берут из органических веществ. Они делятся на 2 группы:
— метатрофы – используют мертвый белок (сапрофиты);
— паратрофы – используют живой белок (паразиты).
Культивирование микробов в лабораторных условиях
Для культивирования бактерий применяют питательные среды. Они могут быть естественными (молоко, морковь, картофель), искусственными (готовят специально). Питательные среды могут быть жидкие и плотные. В зависимости от свойств микробов используют разные среды. Их делят на 4 группы:
простые (универсальные) — на них растут только нетребовательные микробы (стафилококки, кишечная палочка). Это МПА И МПБ — мясопептонный агар и бульон.
сложные (специальные) — на них растут требовательные микробы (стрептококки, пневмококки). Они готовятся из простых сред путем их обогащения:
— сахарный агар,
— кровяной агар
3) элективные (избирательные) — на них растет только один вид микробов, а другие – нет. Например: 1%щелочная пептонная вода — для холерного вибриона, сахарный агар — для стрептококка, сывороточный агар — для дифтерийной палочки и т.д.
4) дифференциально-диагностические — для отличия одного вида от другого по ферментативной активности (среда Эндо, Гисса ).
