Тема: КУЛЬТИВИРОВАНИЕ И ИНДИКАЦИЯ ВИРУСОВ.
БАКТЕРИОФАГИ
Цель: усвоить методы культивирования и индикации вирусов,
методы получения и титрования бактериофагов и их
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
1. Значение открытия Д.И. Ивановского. Этапы развития вирусологии, роль отечественных ученых в развитии вирусологии.
2. Структура и химический состав вирусов и бактериофагов.
3. Типы взаимодействия вируса с клеткой, стадии репродукции, исходы.
4. Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов.
5. Бактериофаги. Взаимодействие фага с клеткой. Умеренные
и вирулентные фаги. Лизогения.
6. Получение и титрование фагов. Применение фагов в медицине, микробиологии и биотехнологии.
7. Внутривидовая идентификация бактерий (биовары, серовары, фаговары и т.д.). Эпидемическое маркирование.
1. Провести овоскопию куриного эмбриона, заразить его
вируссодержащим материалом. Провести вскрытие ранее зараженного эмбриона, визуально оценить состояние оболочек.
2. Описать типы культур клеток, их отличия.
3. Изучить питательные среды для культур клеток: Хенкса, Игла, 199.
4. Изучить и зарисовать методы индикации вирусов:
а) цитопатическое действие — промикроскопировать и зарисовать культуры фибробластов в норме и с ЦПД;
б) реакция гемагглютинации – поставить РГА для индикации вируса в исследуемом материале, оценить и зарисовать;
в) реакция гемадсорбции – зарисовать с таблицы;
г) включения в пораженных клетках – зарисовать с таблиц тельца Бабеша-Негри при бешенстве, тельца Гварниери при натуральной оспе, внутриядерные включения при аденовирусной инфекции;
д) реакция бляшкообразования – с таблицы;
е) «цветная проба» — зарисовать и оценить готовую реакцию.
5. Разобрать особенности строения и зарисовать структуру
бактериофага.
6. Описать способ получения бактериофага.
7. Учесть и зарисовать результаты титрования фага по Аппельману
и по Грациа.
8. Учесть и зарисовать готовые результаты фагодиагностики: реакции
фаголизиса и фаготипирования.
9. Описать препараты фагов, используемые для диагностики, лечения
и профилактики заболеваний.
10. Уборка рабочего места.
11. Защита протокола.
Работа № 1: Техника овоскопии, заражения и вскрытия куриного
Эмбриона
Овоскопия: поместить эмбрион на овоскоп и карандашом отметить границу воздушной полости.
Строение 12-дневного куриного эмбриона
 |
воздушная хорион — аллантоисная
полость оболочка (ХАО)
эмбрион аллантоисная полость
амниотическая желточный мешок
полость
белок
Заражение: скорлупу над воздушной полостью протирают спиртом, обжигают на огне, смазывают 2% настойкой йода, снова протирают спиртом и обжигают. Для заражения на ХАО изогнутыми ножницами срезают скорлупу над воздушной полостью, пинцетом снимают часть подскорлупной оболочки, исследуемый материал в объеме ________ наносят на ХАО (конец иглы не должен быть ниже границы воздушной полости). Отверстие в скорлупе закрывают покровным стеклом и заливают воском или парафином.
Для заражения в аллантоисную полость через прокол в скорлупе вводят иглу шприца так, чтобы конец иглы был ниже уровня воздушной полости на ______. Отверстие в скорлупе заливают воском.
Вскрытие куриных эмбрионов проводят с соблюдением правил асептики. Скорлупу над воздушной полостью обрабатывают так же, как при заражении, и срезают ножницами чуть выше границы прикрепления хорион-аллантоисной оболочки. Визуально оценивают состояние ХАО (помутнение, наличие бляшин и т.д.). Аллантоисную жидкость насасывают пипеткой после прокола ХАО в месте, лишенном крупных кровеносных сосудов. Затем ХАО разрезают ножницами и через отверстие выливают все содержимое в чашку Петри. Амниотический мешок так же разрезают, освобождают от эмбриона, просматривают на наличие поражений.
Работа №2: Культуры клеток для культивирования вирусов
| Свойства | Первичные | Полупереви- ваемые | Перевиваемые |
| Отличия от исходной ткани | |||
| Набор хромосом | |||
| Продолжительность жизни | |||
| Время генерации (дни) | |||
| Признаки озлокачествления | |||
| Линии клеток |
