Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.

Нормальная микрофлора организма человека (продолжение). Дисбиозы

Цель занятия:

1.Изучить микрофлору организма человека.

2.Функции нормальной микрофлоры.

3. Причины и условия формирования дисбактериозов.

4. Коррекция дисбактериозов.

Студент должен знать:

1. Нормальную микрофлору организма человека, ее функции.

2. Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной

микрофлоры организма человека.

3. Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии

оценки.

4. Причины и условия возникновения дисбактериозов, их коррекция.

Студент должен уметь:

  • проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека;
  • проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры.

Студент должен иметь представление:

об особенностях взаимоотношений между отдельными микроорганизмами в различных биотопах организма человека (синергизм, антагонизм и др.).

Работа № 1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта

Цель:изучить микрофлору желудочно-кишечного тракта.

Самостоятельная работа: оценить по готовым посевам и препаратам-мазкам результат исследования кала на дисбактериоз. Зарисовать, описать. Рекомендовать препараты для коррекции дисбактериоза. Сделать вывод.

Задача:

В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Калины, Блаурокка.

а) Описать культуральные свойства колоний.

Среда Блаурокка (для бифидумбактерий)

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Среда Эндо (ДДС для лак+ бактерий)

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Среда Калины (для энтерококков)

Результат:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б) По готовым мазкам, приготовленным из выросших колоний описать морфологические

и тинкториальные свойства микроорганизмов. Окраска по Граму.

Со среды Блаурокка

Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Со среды Эндо

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Со среды Калины

Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Результаты микробиологического исследования кала:

ГБОУ ВПО ТюмГМА, Многопрофильная клиника

Бактериологическая лаборатория

Микробиологическое исследование фекалий

на дисбактериоз

(ост 91500. 11. 0004-2003)

№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть)

от «_____»_________________20_____г.

Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________

возраст___24 года_____________________________________________

Диагноз______________________________________________________

Откуда направлен______________________________________________

Микроорганизмы Количество микроорганизмов в 1 гр. фекалий
норма до 1 г Норма от 1г до 60л норма старше 60л у пациента
Патогенные энтеробактерии нет нет нет
E. coli с нормальной ферментативной активностью 107 — 108 107 — 108 107 — 108 106
E. coli лактозонегативные 105 105 105
E. coli гемолитические нет нет нет 103
Другие условно-патогенные энтеробактерии: а) б) в) 104 104 104 104
Неферментирующие бактерии ? 103 ? 104 ? 104
Энтерококки 105 — 107 105 — 108 106 — 107 105
Стафилококк золотистый нет Нет нет
Стафилококки (сапрофитный, эпидермальный) негемолизирующие ? 104 ? 104 ? 104 ? 103
Бифидобактерии 1010 -1011 109 — 1010 108 — 109 107
Лактобактерии 106 — 107 107 — 108 106 — 107 106
Лактострептококки 107 — 108 107 — 108 107 — 108 108
Грибы ? 103 ? 104 ? 104 ? 104
Клостридии ? 103 ? 105 ? 106 ? 105
Прочие микроорганизмы

Заключение:

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

«____»_____________20____г. Врач _________________

Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

в) Объяснить назначение и механизм действия пробиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу.

Название пробиотика Классифика-ционное положение Действующее начало Получение Применение Способ применения

Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы.

Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию ферментов), в этом биотопе обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.

Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике находится самая разнообразная по составу микрофлора.

Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.

Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть — аэробы.

Вся микрофлора кишечника подразделяется на:

1) облигатную её часть — это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме;

2) факультативная часть, к которой относятся микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний;

3) транзиторная часть микрофлоры, которая носит случайный характер, представители этой микрофлоры неспособны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний.

К резидентной микрофлоре относятся как условно-патогенные микроорганизмы, такие как представители семейства энтеробактерии (протеи, серрации, клебсиеллы и др.), стафилококки, простейшие (псевдомонада, кишечная амеба), энтеровирусы, так и патогенные микроорганизмы, такие как, атипичные эшерихии (лак-), гемолитические стафилококки, вирулентные дрожжеподобные грибы.

Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны — предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.

Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.

Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.

Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С

Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.

Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.

Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.

Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.

Характеристика культуральных и морфологических свойств представителей нормальной микрофлоры кишечника человека.

1. Бифидобактерии(род Bifidobacterium).

Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек — бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях.

Среда Блаурокка готовится следующим образом — к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.

Культуральные свойства бифидобактерии. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост — в виде точек с хвостиками или маленьких комочков.

Морфологические свойства бифидобактерии. В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.

2. Кишечные палочки(Escherihia coli).

Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами.

ДДС — среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительных бактерий) их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.

3. Энтерококки (род Enterococcus).

Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков — 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины.

Среда Калины — это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор).

На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам — первый вид даёт мелкие или средних размеров колонии яркие, красно-вишнёвые, второй вид — розовые, розовато-серые колонии.

Морфологические свойства энтерококков — в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.

Дисбактериоз у взрослых симптомы, лечение


Похожие статьи.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями: