Нормальная микрофлора организма человека (продолжение). Дисбиозы
Цель занятия:
1.Изучить микрофлору организма человека.
2.Функции нормальной микрофлоры.
3. Причины и условия формирования дисбактериозов.
4. Коррекция дисбактериозов.
Студент должен знать:
1. Нормальную микрофлору организма человека, ее функции.
2. Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной
микрофлоры организма человека.
3. Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии
оценки.
4. Причины и условия возникновения дисбактериозов, их коррекция.
Студент должен уметь:
- проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека;
- проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры.
Студент должен иметь представление:
об особенностях взаимоотношений между отдельными микроорганизмами в различных биотопах организма человека (синергизм, антагонизм и др.).
Работа № 1. Микрофлора желудочно-кишечного тракта
Цель:изучить микрофлору желудочно-кишечного тракта.
Самостоятельная работа: оценить по готовым посевам и препаратам-мазкам результат исследования кала на дисбактериоз. Зарисовать, описать. Рекомендовать препараты для коррекции дисбактериоза. Сделать вывод.
Задача:
В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Калины, Блаурокка.
а) Описать культуральные свойства колоний.
Среда Блаурокка (для бифидумбактерий)
Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Среда Эндо (ДДС для лак+ бактерий)
Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Среда Калины (для энтерококков)
Результат:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
б) По готовым мазкам, приготовленным из выросших колоний описать морфологические
и тинкториальные свойства микроорганизмов. Окраска по Граму.
Со среды Блаурокка
Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Со среды Эндо
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Со среды Калины
Результат:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Результаты микробиологического исследования кала:
ГБОУ ВПО ТюмГМА, Многопрофильная клиника
Бактериологическая лаборатория
Микробиологическое исследование фекалий
на дисбактериоз
(ост 91500. 11. 0004-2003)
№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть)
от «_____»_________________20_____г.
Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________
возраст___24 года_____________________________________________
Диагноз______________________________________________________
Откуда направлен______________________________________________
Микроорганизмы | Количество микроорганизмов в 1 гр. фекалий | |||
норма до 1 г | Норма от 1г до 60л | норма старше 60л | у пациента | |
Патогенные энтеробактерии | нет | нет | нет | |
E. coli с нормальной ферментативной активностью | 107 — 108 | 107 — 108 | 107 — 108 | 106 |
E. coli лактозонегативные | 105 | 105 | 105 | |
E. coli гемолитические | нет | нет | нет | 103 |
Другие условно-патогенные энтеробактерии: а) б) в) | 104 | 104 | 104 | 104 |
Неферментирующие бактерии | ? 103 | ? 104 | ? 104 | |
Энтерококки | 105 — 107 | 105 — 108 | 106 — 107 | 105 |
Стафилококк золотистый | нет | Нет | нет | |
Стафилококки (сапрофитный, эпидермальный) негемолизирующие | ? 104 | ? 104 | ? 104 | ? 103 |
Бифидобактерии | 1010 -1011 | 109 — 1010 | 108 — 109 | 107 |
Лактобактерии | 106 — 107 | 107 — 108 | 106 — 107 | 106 |
Лактострептококки | 107 — 108 | 107 — 108 | 107 — 108 | 108 |
Грибы | ? 103 | ? 104 | ? 104 | ? 104 |
Клостридии | ? 103 | ? 105 | ? 106 | ? 105 |
Прочие микроорганизмы |
Заключение:
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
«____»_____________20____г. Врач _________________
Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
в) Объяснить назначение и механизм действия пробиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу.
Название пробиотика | Классифика-ционное положение | Действующее начало | Получение | Применение Способ применения | |
Вывод:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Теоретическая справка
Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы.
Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию ферментов), в этом биотопе обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.
Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике находится самая разнообразная по составу микрофлора.
Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.
Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть — аэробы.
Вся микрофлора кишечника подразделяется на:
1) облигатную её часть — это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме;
2) факультативная часть, к которой относятся микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний;
3) транзиторная часть микрофлоры, которая носит случайный характер, представители этой микрофлоры неспособны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний.
К резидентной микрофлоре относятся как условно-патогенные микроорганизмы, такие как представители семейства энтеробактерии (протеи, серрации, клебсиеллы и др.), стафилококки, простейшие (псевдомонада, кишечная амеба), энтеровирусы, так и патогенные микроорганизмы, такие как, атипичные эшерихии (лак-), гемолитические стафилококки, вирулентные дрожжеподобные грибы.
Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны — предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.
Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.
Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.
Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С
Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.
Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.
Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.
Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах.
Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.
Характеристика культуральных и морфологических свойств представителей нормальной микрофлоры кишечника человека.
1. Бифидобактерии(род Bifidobacterium).
Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек — бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях.
Среда Блаурокка готовится следующим образом — к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.
Культуральные свойства бифидобактерии. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост — в виде точек с хвостиками или маленьких комочков.
Морфологические свойства бифидобактерии. В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.
2. Кишечные палочки(Escherihia coli).
Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами.
ДДС — среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительных бактерий) их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.
3. Энтерококки (род Enterococcus).
Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков — 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины.
Среда Калины — это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор).
На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам — первый вид даёт мелкие или средних размеров колонии яркие, красно-вишнёвые, второй вид — розовые, розовато-серые колонии.
Морфологические свойства энтерококков — в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.