Среды, предназначенные для стерилизации в автоклаве, наливают не выше чем на половину высоты сосуда. Сосуды со средами закрывают ватными пробками, которые предохраняют среду от заражения микрофлорой, находящейся в окружающем воздухе. Пробки должны быть достаточно плотными, с равномерным распределением волокон ваты, так как через них проходит газообмен культуры с окружающей средой. Слишком плотные пробирки затрудняют снабжение культур воздухом. Для приготовления пробки плоский кусочек ваты, взятый вдоль волокна, скатывают валиком. Чтобы придать пробке прочность, ее прокатывают между ладонями и частым стеклом лежащим на столе. Длина пробки для обычной пробирки дб. около 4 см. Пробка должна входить в пробирку на 1,5-2 см. Для сохранения формы пробку вынимают из горлышка, слегка вращая. Удобно отвертывать пробку чистой марлевой салфеткой. Нельзя обвертывать пробки сосудов, которые будут стерилизоваться в автоклаве целлофаном или другими материалами, не пропускающими пар, так как пар должен обязательно проникать через пробку в сосуд иначе среды не нагреются до нужной температуры и не прост стерилизуются.
Стерилизация стеклянной посуды:
Основным способом стерилизации стеклянной посуды является стерилизация сухим горячим паром. Она осуществляется в сушильных шкафах или печках Пастера при температуре 160-180° С в течении 1,5-2 часов. При этом погибают и вегетативные клетки и их споры.
Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после нагревания. Развертывают стерильную бумагу непосредственно перед употреблением. Специфика работы с микроорганизмами требуют применения в микробиологии особой посуды. В частности , микробиологии , постоянно имеют дело с чашками Петри и их модификациями — чашками Коха и Виноградовского .Пипетки готовят к стерилизации так : в концы пипеток , которые берутся в рот , вставляют ватные тампоны . Пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4-5 см. Обмотку начинают с конца , которым берется среда .
Постепенно движением бумаги по спирали оканчивают обмотку у того конца, который берется в рот . Завернутые пипетки для предохранения их от загрязнения и разрывов бумаги , перед стерилизацией обычно заворачивают по несколько штук вместе или помещают в спиральные металлические и картонные пеналы . Закрепляют бумагу над пипеткой и завязывают ее ниткой , у верхнего и нижнего концов . Каждую чашку Петри лучше завертывать отдельно и закреплять плотной ниткой . Шпатели так же стерилизуют завернутыми в бумагу , каждый из них заворачивают отдельно . Колбы и пробирки закрывают ватными пробками , предохраняющими горлышко от ныли . Посуду загружают в сушильный шкаф не плотно , чтобы обеспечить некоторую циркуляцию воздуху и равномерный надежный прогрев стерилизующего материала . (.утильный шкаф при стерилизации д.б. закрыт . По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор , пока температура в нем не упадет до 100-70 С . так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала , а сильно нагретое стекло может растрескаться. Посулу можно стерилизовать и в автоклаве . Приборы для культивирования микроорганизмов ; а так же детали этих приборов , резиновые пробки и шланги стерилизуются автоклавированием . Предметы подлежащие стерилизации в автоклаве , завертывают в бумагу Некоторые предметы ( мембранные фильтры , метл. инструменты ) иногда стерилизуют длительным кипячением и. дистиллированной воде. Однако этим способом пользуются редко , гак как длительное кипячение может привести к повреждению обрабатываемого материала, а уменьшение времени кипячения не обеспечит стерильности материала Предметы изготовленные из термолабильных пластмасс , например центрефужные пробирки . стерилизуют ультрафиолетовыми .лучами с помощью бактерицидной лампы . После облучения предметы до использования следует хранить в стерильной посуде
Порядок выполнения работы:
1. Уч-ся демонстрируют автоклав ,сушильный шкаф , кипятильник Коха , машину для приготовления пробок , преподавать знакомить с устройством и принципом их действия.
2. Подготовить 2 чашки Петри , колбу , 2 пробирки и пипетки к стерилизации .
3. Наполнить 2 пробирки (на 100 мл.) водопроводной водой , 2 колбы (на 100мл.) закрыть ватными пробками .
4. Поместить для стерилизации горячим воздухом в сушильный шкаф подготовленную стеклянную посуду.
5. Поместить пробирки и колбы с водой . а так же колбы с ранее приготовленным мясо-пептонным агаром в корзинки . и все это разместить в автоклаве .
Вопросы для самоконтроля.
1. Что называют стерилизацией ‘?
2. Какие виды стерилизации вам известны ?
3. Какой вид стерилизации наиболее широко применяется в микробиологической практике ?
4. Какие методы тепловой обработки вам известны ?
5. Как стерилизуют посуду ? Как ее готовят к стерилизации ?
6. Каким образом удобнее стерилизовать питательные среды ?
7. Что называют стерилизацией ? В чем сущность метода стерилизации ‘?
8. Зачем вводят фильтры в пипетки перед стерилизацией ?
9. Как готовить биологическую пробку ? Какие требования предъявляются к биологическим пробкам ?
10 .Каково назначение аппаратов . автоклава кипятильника Коха сушильного шкафа ?
1. Оформление отчета по лабораторному занятию.
2. Подготовиться к защите лабораторного занятия.
Лабораторная работа № 6
