Тема: Микробиологическая диагностика урогенитальных инфекций, вызванных микоплазмами и уреаплазмами
Задача №1 Исследование соскоба из цервикального канала от обследуемой с бесплодием с помощью тест-системы MуcoplasmaDUO
Набор Mуcoplasma DUO позволяет культивировать, идентифицировать и дифференциально титровать урогенитальные микоплазмы, а также определять чувствительность культуры к антибиотикам. Метод позволяет получить результаты в течение 24-48 ч.
Материалом для исследования являются соскобы из уретры, цервикального канала, влагалища (и др.). Так как микоплазмы прилипают к поверхности эпителиальных клеток, материал следует собирать со слизистой с помощью специальной цервикальной щеточки после чего погрузить щеточку в 2 мл транспортной среды и взбалтать, чтобы смыть все клетки в среду.
Идентификация и титрование урогенитальных микоплазм основаны на специфических метаболических свойствах каждого микроорганизма, которые гидролизуют:
— Ureaplasmaurealiticum (UU) – мочевину;
— Mycoplasma hominis (MH) – аргинин.
При этом образуется ион аммония и происходит защелачивание среды. Вследствие этого изменяется цвет (с желтого на красный) индикатора кислотности среды, что позволяет визуализировать реакцию. Таким образом, при желтой окраске содержимого лунок – микоплазмы отсутствуют, при красной окраске – микоплазмы присутствуют в пробе. Если покраснела лунка U – в пробе присутствует UU; если покраснела лунка Н – в пробе присутствует МН; если покраснели лунки U и Н – в пробе присутствуют и UU, и МН.
Т и т р о в а н и е (определение количества) основано на принципе разведения исследуемого материала в жидкой среде. Проба последовательно разводится в транспортной среде, в лунке D (разведение 10-1) и, наконец, в лунках U 104 и Н 104 (разведение 10-2). Таким образом, может быть определен титр микоплазм. Этот титр соответствует лунке, цвет которой изменился на красный через 24-48 ч инкубации.
Данный набор позволяет определить титры порядка 10-3 – 10-4 мл, которые уже считаются этиологически значимыми.
Учет результатов: первые результаты считываются через 24 ч инкубации. При наличии положительной реакции в лунке с высоким титром (104), получают окончательный результат. Второй раз считывают результаты через 48 ч в следующих случаях:
— если нужно подтвердить отрицательный результат,
— определить присутствие микоплазм в низких титрах,
определить штаммы, присутствующие в высоком титре, но характеризующиеся медленным метаболизмом
Вывод: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Определение чувствительности культуры к антибиотикам.
Микроплата для определения чувствительности к антибиотикам включает два ряда по 8 лунок, содержащих различные антибиотики. Разные концентрации антибиотиков в лунках позволяют получить профиль чувствительности тестируемых микоплазм (чувствительная, умеренно устойчивая, устойчивая). Лунки Тс служат контролем роста без антибиотиков. Определение осуществляется с использованием содержимого лунки Х набора MуcoplasmaDUO.
Оценка-интерпретация. Тест интерпретируется тогда, когда контрольные лунки роста изменят цвет с желтого на красный. На практике плата исследуется через 24 ч и через 48 ч для установления низкой резистентности:
— 2 желтых лунки – отсутствие роста (чувствительна),
— 2 красных лунки – рост в присутствии антибиотиков (устойчива),
— лунка с низкой концентрацией антибиотика – красная, лунка с высокой концентрацией антибиотиков – желтая (умеренно устойчива).
Для клиндамицина и пристинамицина используется лишь одна концентрация антибиотика, поэтому возможны только два варианта результата: культура чувствительная или устойчивая.
| Спектр используемых антибиотиков |
| Название антибиотика | Код антибиотика | Результат теста |
| Офлоксацин (1мг/л и 4 мг/л) | OFX1, | |
| OFX4 | ||
| Клиндамицин (2мг/л) | CM2 | |
| Пристинамицин (2мг/л) | PT2 | |
| Эритромицин (1мг/л и 4 мг/л) | E1, | |
| E4 | ||
| Джозамицин (2 мг/л и 8 мг/л) | JM2, | |
| JM8 | ||
| Тетрациклин (4 мг/л и 8 мг/л) | TE4, | |
| TE8 | ||
| Миноциклин (4 мг/л и 8 мг/л) | MNO4, | |
| MNO8 | ||
| Доксициклин (4 мг/л и 8 мг/л) | DO4, | |
| DO8 | ||
| Контроль роста без антибиотика | Tc, Tc |
Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Заключение:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
